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RT-PCR試劑盒使用注意事項(xiàng)

瀏覽次數(shù):1227發(fā)布日期:2021-12-13
  RT-PCR試劑盒逆轉(zhuǎn)錄和PCR在同一反應(yīng)體系中進(jìn)行,反應(yīng)過(guò)程中無(wú)需添加試劑,無(wú)需打開(kāi)管蓋,在避免污染的同時(shí)提高了檢測(cè)靈敏度和實(shí)驗(yàn)效率。本試劑盒包括全新高效逆轉(zhuǎn)錄酶、快速熱啟動(dòng)DNA聚合酶,同時(shí)包含適用于逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增的反應(yīng)緩沖液和實(shí)驗(yàn)中所需的反應(yīng)組分。經(jīng)過(guò)重組表達(dá)的SuperRT逆轉(zhuǎn)錄酶RNaseH活性缺失,減少了逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中RNA的降解,更容易獲得全長(zhǎng)的cDNA。
  該逆轉(zhuǎn)酶逆轉(zhuǎn)錄效率高,可對(duì)少量RNA模板進(jìn)行良好的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。SuperRT逆轉(zhuǎn)錄酶與RNA親合性高,能通讀GC含量高,二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板,獲得高產(chǎn)量的cDNA。PCR反應(yīng)使用的DNA聚合酶具有擴(kuò)增效率高、延伸速度快的優(yōu)良性能。*的緩沖體系使逆轉(zhuǎn)錄酶和聚合酶同時(shí)發(fā)揮功效。使用該試劑盒能夠方便快捷的在同一個(gè)反應(yīng)管內(nèi)完成逆轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增反應(yīng)。使用本試劑盒擴(kuò)增得到的目的產(chǎn)物3′端附有一個(gè)″A″堿基,可直接用于T/A克隆。
  RT-PCR試劑盒注意事項(xiàng):
  1.用于cDNA合成反應(yīng)的溶液試劑盡量可能用DEPC進(jìn)行處理,并在高壓滅菌后使用。有些試劑不能高壓滅菌時(shí),首先用經(jīng)過(guò)滅菌的器具、水等配制溶液后,再將溶液進(jìn)行過(guò)濾除菌處理。
  2.RNA樣品要避免基因組DNA污染。
  3.避免多次反復(fù)凍融RNA,使RNA保持在冰浴中處融化狀態(tài)。
  4.試劑盒的各組成成分應(yīng)在-20℃保存。
  5.cDNA產(chǎn)物應(yīng)置于-20℃保存。
  RT-PCR試劑盒合理配備了與cDNA鏈合成反應(yīng)相關(guān)的各種組分,該試劑盒中的TIANScriptM-MLV具有高效的逆轉(zhuǎn)錄酶活性,對(duì)后續(xù)的PCR或定量PCR實(shí)驗(yàn)兼容性好,適合于各種PCR耐熱聚合酶。
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